PO-236:

食用油分解菌Pseudomonas sp. NP-2株の単離とキャラクタリゼーション

【目 的】一般家庭から，年間約10万トンも排出されている廃食用油を処理する手段として，食用油分解菌とその産生リパーゼの利用が検討されている。また，分解菌の産生リパーゼは，食品加工や化粧品，洗剤などで幅広く利用されているが，さらに高機能なリパーゼとその産生菌が求められている。そこで，我々は，新たな食用油分解菌の単離を試み，計43株の分解菌を得ることに成功した。今回は，その中で最も分解能が高かったNP-2株について報告する。
【方 法】まず，海水や土壌などの試料から，1%（w/v）キャノーラ油を含む液体培地による集積培養と，キャノーラ油を含む寒天培地を用いたハロー形成によって食用油分解菌を単離した。菌種の同定は，16S rDNAの塩基配列をBLAST検索にかけることで行った。油の分解率は，ヘキサンで抽出したキャノーラ油の残存重量から算出した。菌体と培養液上澄中のリパーゼ活性を持つバンドの検出は，SDS-PAGEとトリブチリンを基質とするザイモグラムで行った。さらに，リパーゼ遺伝子は，primer walking（PW）法とinverse PCR（I-PCR）法を用いて解析した。
【結果と考察】16S rDNAの塩基配列を解析した結果，NP-2株はPseudomonas simiae WCS417株と99.7%（1,488/1,492bp）の相同性を示した。本株は，5〜45℃で増殖したが，その至適温度は15〜25℃であると考えられた。また，ハローアッセイの結果，本株はキャノーラ油だけでなく，ゴマ油やラードも分解できることが示された。さらに，キャノーラ油の分解率を測定したところ，25℃の培養2週間で約82.3%だった。SDS-PAGEとザイモグラムで調べた結果，菌体と上澄試料から約52.5kDaにリパーゼ活性を持つバンドが検出された。さらに，PW法とI-PCR法で検出したリパーゼ遺伝子は，1,431bpのORFから成り，推定される分子量は49954.63Daであった。BLAST検索の結果，既報のLipTK-3と塩基配列で92.9%，アミノ酸配列で96.8%の相同性を持つことが示された。また，既知のABCトランスポーターと高い相同性を示す配列や，推定アミノ酸配列中にリパーゼ固有の保存領域GXSXGが存在することが示され，サブファミリーI.3に属することが示唆された。

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