PB-035:

非常に低い濃度のNH₄⁺（36 _ 150 _M）を含む培地による好気性アンモニア酸化微生物（AOM）のMPN計数

【目的】　環境中では，oligotrophicなアンモニア酸化微生物（AOM）が重要であると考えられており，アンモニア酸化古細菌（AOA）もそうである。これまで，1 mMレベルより低いNH₄⁺を含む培地での計数および分離例はほとんどないが，これは，技術的な困難を伴うためと考えられる。本研究では，36 _ 150 _MのNH₄⁺を含む培地を用いて，土壌中のAOMをMPN計数し，問題点と，その解決策を示す。【方法】　Suwaら(1994)のC基礎培地(pH 7.6)に，NH₄⁺を0.036, 0.15, 1.5, 75 mM添加し，それぞれCUL2, CUL, CL, CH培地とした。CUL＋0.15 mM NO₂⁻ + NO₃⁻をCULN培地, これに土壌抽出液を培地の10%相当添加してNEX培地とした。これらを用いて，北浦の堆積物，茨城県の谷津田および畑土壌のAOMをMPN計数した。【結果】　36 _M NH₄⁺を含むCUL2培地で堆積物中のAOMをMPN計数した結果，より低い希釈率の試料懸濁液を接種した培養でNO₂⁻+NO₃⁻が検出されなかったが，より高い希釈率の懸濁液を接種した培養でNO₂⁻+NO₃⁻が検出された．前者では生成されたNO₂⁻+NO₃⁻が消費されたと考えられた．この解決策として；1) ¹⁵NH₄⁺をやや高めの濃度で基質とし，2) 硝化によって生成したNO₂⁻+NO₃⁻が消費し尽されないように予めNO₂⁻+NO₃⁻を加えた培地（CULN培地）を作成し，畑土壌のAOMをMPN計数した。生成した¹⁵NO₂⁻＋¹⁵NO₃⁻はGC/MSで検出した。その結果，従来，汎用されてきたCL培地でのMPN計数値を14.5倍上回る計数値を得た。この方法はNO₂⁻+NO₃⁻が若干含まれる土壌抽出液を含む培地（NEX培地）によるMPN計数にも適用でき，CULN培地と同様の計数値を得た。この結果は，これまで未知のAOMが計数の対象となった可能性を示唆し，現在，培養されたAOMの系統を解析中である。

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